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生物 高校生

この問題を教えてください!

課題 D-3 下の図を参考に次の文章の空欄を埋めよ 細胞膜はタンパク質を通さない。そこでタンパク質を分泌するためには(① )と呼ばれ る特別な装置が必要である。分泌されるタンパク質には( 12 )に( 13 )ペプチドがつ いた形で翻訳される。これは分必される際に膜上の( 0 )によって切断され、( 5 )タ ンパク質となる。 PET226は( 16 )という®を付加できるようになっており、タグは(① ) に付加できるようになっている。 大腸菌で大量にタンパク質を作らせると、( 1® )を形成することがある。これはタンパク 質の正しい折りたたみ( 19 )が追いつかないことが主な原因である。そこで、生物が本 来持っている、折りたたみを補助するタンパク質群である( 20 )を増強した大腸菌を用 いることで、回避できる可能性がある。 PET226 マルチクリーニングサイト周辺 T7 promoter primer #69348-3 Bgl II T7 promoter lac operator Xbal rbs BSPMI pelB leader MscI Ncol Ndel BamHI EcoRI Sacl MetLysTyrLeuLeuProThrAlaAlaAlaGlyLeuLouLeuLeuAlaAlaGInProAlaMetAlqMetAsp1leGlyIleAsnSerAspProAsnSerSerSer Sall Hind II Eag」 Not」 Aval Xhol His-Tag signal peptidase Bpu11021 ValAspLysLeuAlaAlaAlaLeuGluHIsHisHisHIsHIsHisEnd T7 terminator T7 terminator primer #69337-3

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生物 高校生

教えて欲しいです

課題 D-2 下の図を参考に次の文章の空欄を埋めよ 大腸菌で組換えタンパク質を生産させる時には、大腸菌由来のタンパク質を取り除 き、目的のタンパク質を(① )する必要がある。そのために目的タンパク質に付加 されるのが(2 )と呼ばれるアミノ酸配列である。 市販の大腸菌用( 3 )ベクターであるPET156では、目的タンパク質遺伝子である インサートの(4 )コドンを( 5 )のATGに合わせて挿入することで、が目的タン パク質の(6)末端に( ⑦ )タンパク質として、ニッケルイオンと相互作用する (His)6 配列が付加される。精製はゲル担体に固定された( ® )との( 9 )を利用 して行う。また、融合部にはトロンビンなどの認識部位が挿入されており、精製後、 当該( 0 )処理により、2を除けるように設計されている。 PET156 マルチクリーニングサイト周辺 T7 promoter primer #69348-3 T7 promoter lac operator rbs Bgl|| AGATCTCGATCCCCCGAAATTAATACCACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAG/ Xbal Ncol His-Tag Nde l Xhol BamHI HetGlySerSerHIisHIsHI aHIsHIaHI aSerSerGlyLouVaiProArgGlySerHIsHetLcuGluAspProAlaAlaAsnLysAlaArg Bpu1102| thrombin T7 terminator AAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTIG LysGluAlaGluLcuAlaAlaAlaThrAlaGluGInEnd T7 terminator primer #69337-3

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生物 高校生

下記の問題を教えて欲しいです

B) 欠失 口の部分を欠失させる場合 部位特異的変異導入の実際 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACITGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGAてCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' * 欠失を行う のより正確なPCR用DNAポリメラーゼを使う 2変異の入ったPCR用プライマーの設計 変異を入れたいところを中心に、前後の広い範囲の 塩基配列(相補鎖も)を書き出す。 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACIGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTG|CTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5 オーバーラップ領域を15 base 選定する。 (変異部分をなるべく中心にする) 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGAC|GAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTG|CTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' * 変異部分 から 18 base 3" 側に伸ばす。 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGAC|GAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTG|てTTTTGGGACてGてAATGGGTTG-5' 部分を削除して、プライマー配列とする 5-TCGTGAC「GAAAACCCTGGCGTTACC-3" プライマー内部の塩基配列を変えることで、終止コドン 挿入やアミノ酸の置換、欠失や挿入が可能 A) 置換 3-CAAAATGTTCGAGCACTG|TTTTTGGG-5" *欠失のサイズに制限はありません。 タカラバイオのキットのマニュアルより 図3B. 欠失変異のためのプライマー設計 GAC」の部分を TGA に置換する場合 C) 挿入 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGACCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' * 置換を行う |の部分に(CTCGAG)を挿入する場合 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTTGATGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCAACT|ACCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' GGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3" 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGAC1 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGA|CCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' オーバーラップ領域を15 base 選定する。 (変異部分をなるべく中心にする) * Insertion を行う 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTTGATGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCAACT|ACCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACTCTCGAGGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGAGAGCTC|CCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5' * 変異部分 口から 18base 3"側に伸ばす オーバーラップ領域を15 base 選定する。 (変異部分をなるべく中心にする) 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTTGATGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3" 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCAACTACCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5" 部分を削除して、プライマー配列とする 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACTCTCGAGGGGAAAACCCCTGGCGTTACCCAAC-3' 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGAGAGCTC|CCCTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5" * 変異部分 から 18 base 3'側に伸ばす 5-CGTCGTTGATGGGAAAACCCTGGCGTT-3' 3-CAGCAAAATGTTCGAGCAACTACCCTT-5" 5-CGTCGTTTTACAACGTCGTGACTCTCGAGGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC-3" 3-GCAGCAAAATGTTCGAGCACTGAGAGCTCてててTTTTGGGACCGCAATGGGTTG-5" *1~15塩基の置換が可能です。 部分を削除して、プライマー配列とする 図3A.置換変異のためのプライマー設計 5-GACTCTCGAGGGGAAAACCCTGGCGTTA-3' 3-AAAATGTTCGAGCACTGAGAGCTCてててTT-S" *1~15塩基の挿入が可能です。 この場合は終止コドンだが、任意のコドンに変換して 対応するアミノ酸に置換することが可能 図3C. 挿入変異プライマーの設計 課題0-5 図AのGACはASP(アスパラギン酸)のコドンである。ここを下記のアミノ酸に置換する時の塩基配列を記せ 1) Met、2)Trp、3) His (2種類あり) コドン表は第8回の資料を参照し、 DNA配列で回答すること(UはT)。

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